The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
Tau双切口酶质粒(h): sc-400136-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- Tau 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- Tau双切酶质粒（h）和Tau双切酶质粒（h2）编码针对MAPT的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：Tau: sc-166060，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
Tau双切口酶质粒(h) | sc-400136-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Tau双切口酶质粒(h2) | sc-400136-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MAPT 编码人类微管相关蛋白 tau，这是一种神经元蛋白，负责稳定并组织微管网络，以支持轴突运输、神经突起生长以及细胞骨架的可塑性。Tau 的功能受包括磷酸化在内的翻译后修饰调控，这些修饰可调节其与微管的结合，并影响依赖细胞骨架的细胞内运输与应激反应。Tau 稳态失衡及其聚集与 tau 蛋白病（tauopathies）以及更广泛的神经退行性疾病生物学相关，在这些过程中，微管动力学改变与蛋白质稳态（蛋白质质量控制）紊乱与突触功能障碍相互交织。因此，MAPT 在调控神经元极性、细胞骨架重塑和蛋白质质量控制的通路中被广泛研究。
Tau 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 MAPT 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对MAPT内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏MAPT的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了MAPT基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。