TAP1 Plasmide Double Nickase (h): sc-405210-NIC

TAP1 (Transporter Associated with Antigen Processing 1) codifica un trasportatore della famiglia delle cassette leganti l’ATP (ABC) che forma un eterodimero con TAP2 per traslocare peptidi derivati dal proteasoma dal citosol al reticolo endoplasmatico, dove vengono caricati sulle molecole di MHC di classe I. Questo processo è centrale per l’elaborazione e la presentazione dell’antigene, collegando la segnalazione indotta dagli interferoni, l’attività dell’immunoproteasoma e la funzione del complesso di caricamento peptidico del RE alla sorveglianza immunitaria delle cellule T CD8+. Un’alterata espressione o funzione di TAP1 è associata a una ridotta presentazione di MHC I sulla superficie cellulare e a fenotipi di evasione immunitaria osservati in molteplici contesti tumorali, nonché, in rari difetti di presentazione dell’antigene, a caratteristiche di immunodeficienza primaria. TAP1 è pertanto frequentemente studiato nelle vie che regolano le interazioni ospite–patogeno, l’immunologia dei tumori e i meccanismi che controllano l’assemblaggio e il traffico di MHC I.

TAP1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TAP1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TAP1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TAP1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TAP1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.