Plasmide CRISPR d'Activation (h) TACE/ADAM17: sc-400827-ACT

ADAM17, également connue sous le nom de TACE, est une métalloprotéase ancrée à la membrane qui catalyse le clivage de l’ectodomaine d’une grande diversité de substrats, notamment le TNF-α, des ligands de l’EGFR (tels que l’amphiréguline et le TGF-α) ainsi que plusieurs molécules d’adhésion. Par une protéolyse régulée à la surface cellulaire, TACE/ADAM17 assure l’intégration des signaux inflammatoires avec des voies dépendantes des facteurs de croissance, dont EGFR–MAPK/ERK et NF-κB, en modulant la libération de cytokines, l’activation des récepteurs et le remodelage tissulaire. Une activité d’ADAM17 dérégulée a été associée à l’inflammation chronique et à des réseaux de signalisation liés au cancer, et son rôle dans la communication entre cellules immunitaires, l’homéostasie épithéliale et le dialogue au sein du microenvironnement fait l’objet de nombreuses études.

TACE/ADAM17 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ADAM17 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TACE/ADAM17 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ADAM17 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ADAM17, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TACE/ADAM17. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ADAM17 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TACE/ADAM17 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TACE/ADAM17 dans les cellules tumorales présentant une expression de ADAM17 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.