T-FABP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423411

Panoramica

Fabp9 codifica la testis fatty acid–binding protein (T-FABP), uno “chaperone” lipidico implicato nel traffico intracellulare di acidi grassi a catena lunga e di altri ligandi idrofobici nella linea germinale maschile. Regolando l’assorbimento, il sequestro e la consegna degli acidi grassi a enzimi metabolici e membrane, T-FABP è collegata a vie di omeostasi lipidica che influenzano la β-ossidazione mitocondriale, il rimodellamento delle membrane e l’equilibrio redox durante la spermatogenesi. Alterazioni dell’attività della famiglia FABP sono ampiamente associate a disregolazione metabolica e segnalazione infiammatoria, e Fabp9 è spesso studiato nel contesto dello sviluppo degli spermatozoi, della motilità e di fenotipi legati alla fertilità. Nei modelli murini, Fabp9 rappresenta un nodo sperimentalmente gestibile per indagare come la gestione dei lipidi nelle cellule germinali influisca sulla biologia riproduttiva e sull’adattamento metabolico in risposta allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO T-FABP (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Fabp9 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Fabp9 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Fabp9 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina T-FABP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Fabp9 per lo studio della segnalazione di T-FABP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Fabp9 critici per la funzione di T-FABP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Fabp9 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal T-FABP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal T-FABP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Fabp9. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal T-FABP Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR T-FABP (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Fabp9 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Fabp9 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.