Syntaxin 17 Plasmide Double Nickase (h): sc-403251-NIC

STX17 codifica la sintassina 17, una proteina SNARE ancorata al reticolo endoplasmatico (ER) che si localizza alle membrane associate ai mitocondri e agli autofagosomi, dove media le fasi tardive dell’autofagia promuovendo la fusione tra autofagosoma e lisosoma. Attraverso interazioni con SNAP29 e VAMP8, STX17 sostiene il flusso autofagico, il controllo di qualità degli organelli e l’adattamento cellulare allo stress da carenza di nutrienti, con effetti a valle sull’omeostasi mitocondriale e sulla segnalazione dell’immunità innata. L’alterazione del traffico e dell’autofagia dipendenti da STX17 è stata associata a mitofagia modificata e a uno squilibrio della proteostasi, processi rilevanti per la neurodegenerazione, la tolleranza allo stress nelle cellule tumorali e fenotipi infiammatori. In quanto nodo all’interfaccia tra fusione di membrane e autofagia selettiva, STX17 è spesso studiata nei pathway che regolano la funzione lisosomiale, il turnover mitocondriale e la sopravvivenza cellulare in condizioni di stress.

Syntaxin 17 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus STX17 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di STX17. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di STX17. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con STX17 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.