Syntaxin 17 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403251-ACT

STX17 codifica la syntaxina 17, una proteina della famiglia SNARE che si localizza al reticolo endoplasmatico e alle membrane associate ai mitocondri e supporta eventi di fusione di membrana centrali per l’omeostasi cellulare. La syntaxina 17 è un mediatore chiave della fusione tra autofagosoma e lisosoma, coordinando le fasi tardive dell’autofagia e della mitofagia con la consegna del carico ai compartimenti degradativi. Attraverso il suo ruolo nel traffico vescicolare e nel controllo di qualità degli organelli, STX17 influenza la proteostasi, l’adattamento allo stress e vie di segnalazione metabolica che intersecano la funzione mitocondriale. La disregolazione delle vie dell’autofagia e della rimozione mitocondriale a cui partecipa la syntaxina 17 è ampiamente implicata nella neurodegenerazione, nella biologia delle infezioni e nei fenotipi di stress cellulare associati al cancro, stimolando studi meccanicistici sul controllo dell’espressione di STX17.

Syntaxin 17 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di STX17 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Syntaxin 17 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus STX17 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione STX17, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Syntaxin 17. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus STX17 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Syntaxin 17 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Syntaxin 17 nelle cellule tumorali con espressione di STX17 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.