Syne-2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-403318-LAC

SYNE2 codifica Syne-2 (nesprina-2), una gigantesca proteina a ripetizioni di spectrina del complesso LINC che attraversa la membrana nucleare esterna e collega il nucleo al citoscheletro di actina tramite interazioni del dominio KASH con le proteine SUN. Questo collegamento nucleo-citoscheletrico sostiene il posizionamento del nucleo, la meccanotrasduzione e l’organizzazione del citoscheletro perinucleare, con effetti a valle su polarità cellulare, migrazione e dinamiche nucleari associate al ciclo cellulare. Attraverso il suo ruolo nel mantenimento dell’architettura dell’involucro nucleare e nella trasmissione delle forze, Syne-2 influenza l’organizzazione della cromatina e le risposte trascrizionali a stimoli meccanici. Alterazioni della funzione o dell’espressione di SYNE2 sono state associate a fenotipi che coinvolgono instabilità dell’involucro nucleare e vengono studiate nel contesto della cardiomiopatia, della biologia delle malattie neuromuscolari e dell’invasività delle cellule tumorali.

Le particelle di attivazione lentivirale Syne-2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SYNE2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Syne-2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SYNE2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Syne-2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SYNE2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.