Syne-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402804

Panoramica

SYNE1 codifica Syne-1 (nesprina-1), una grande proteina di impalcatura contenente ripetizioni di spettina del complesso LINC, che collega il nucleo al citoscheletro attraverso interazioni con proteine SUN, actina e filamenti intermedi. Regolando il posizionamento nucleare, la meccanotrasduzione e l’organizzazione del citoscheletro, Syne-1 influenza processi quali la migrazione cellulare, la polarità e l’architettura dei tessuti. L’alterazione di SYNE1 è stata associata a fenotipi di neurosviluppo e neurodegenerazione, inclusa l’atassia cerebellare autosomica recessiva, ed è stata riportata anche in studi di genomica dei tumori, in cui un accoppiamento nucleo-citoscheletro alterato può influenzare la stabilità del genoma e il comportamento cellulare. Queste caratteristiche rendono SYNE1 un bersaglio rilevante per lo studio della biologia dell’involucro nucleare, della trasmissione delle forze e di fenotipi cellulari associati a malattia in sistemi modello umani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Syne-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SYNE1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SYNE1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SYNE1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Syne-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SYNE1 per lo studio della segnalazione di Syne-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SYNE1 critici per la funzione di Syne-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SYNE1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Syne-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Syne-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SYNE1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Syne-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Syne-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SYNE1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SYNE1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.