Plasmide CRISPR d'Activation (h) Synaptogyrin-3: sc-403955-ACT

SYNGR3 code la synaptogyrine‑3, une protéine membranaire des vésicules synaptiques enrichie dans les neurones et impliquée dans la régulation du trafic vésiculaire, de la dynamique des pools de vésicules et de la libération des neurotransmetteurs. Les protéines de la famille des synaptogyrines participent à l’organisation de la membrane présynaptique et peuvent influencer la plasticité synaptique en modulant le recyclage des vésicules et le couplage aux processus d’exocytose et d’endocytose. Des altérations de la fonction des vésicules synaptiques et de la signalisation présynaptique constituent des caractéristiques récurrentes dans la biologie des maladies neuropsychiatriques et neurodégénératives, ce qui fait de SYNGR3 une cible pertinente pour l’étude des mécanismes de dysfonction synaptique. En tant que facteur associé aux vésicules et exprimé dans les neurones, SYNGR3 est utile pour disséquer les voies qui gouvernent l’homéostasie présynaptique et le remodelage synaptique dépendant de l’activité.

Synaptogyrin-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SYNGR3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Synaptogyrin-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SYNGR3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SYNGR3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Synaptogyrin-3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SYNGR3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Synaptogyrin-3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Synaptogyrin-3 dans les cellules tumorales présentant une expression de SYNGR3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.