Synapsin IIa Plasmide Double Nickase (h): sc-404715-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Synapsin IIa Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Synapsin IIa Double Nickase Plasmid (h) e il Synapsin IIa Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SYN2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Synapsin IIa Antibody (1): sc-136086
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Synapsin IIa Plasmide Double Nickase (h) | sc-404715-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Synapsin IIa Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404715-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SYN2 codifica la sinapsina IIa, una fosfoproteina arricchita nei neuroni che si associa alle vescicole sinaptiche e al citoscheletro di actina per regolare il traffico vescicolare, il mantenimento del pool di riserva e il rilascio di neurotrasmettitori dipendente dall’attività. La funzione della sinapsina IIa è controllata dalla fosforilazione a valle di cascate di segnalazione neuronale, incluse le vie cAMP/PKA, le chinasi Ca2+/calmodulina-dipendenti e le vie MAPK, collegando l’attività sinaptica alla mobilizzazione delle vescicole. Attraverso i suoi ruoli nella sinaptogenesi e nella plasticità presinaptica, alterazioni dell’espressione o della regolazione di SYN2 sono state collegate a una compromissione dell’eccitabilità di rete e a fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici, inclusa la suscettibilità alle crisi epilettiche.
Synapsin IIa Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SYN2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SYN2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SYN2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SYN2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.