Plásmido CRISPR de Activación (h) SUZ12: sc-401551-ACT

SUZ12 codifica un componente central del Complejo Represor de Polycomb 2 (PRC2), que coopera con EZH2 y EED para establecer y mantener estados de cromatina represivos mediante la metilación de H3K27. Al modular la accesibilidad de la cromatina, SUZ12 contribuye a programas estables de silenciamiento transcripcional que regulan la especificación de linaje, el control del ciclo celular y redes génicas del desarrollo. La actividad alterada de PRC2 en la que participa SUZ12 se ha vinculado a una regulación epigenética perturbada en múltiples contextos de cáncer y a fenotipos del neurodesarrollo, lo que lo convierte en un nodo clave en estudios de remodelación de la cromatina y homeostasis transcripcional. La represión dependiente de SUZ12 se cruza con vías que controlan la diferenciación, la proliferación y las respuestas al daño del ADN a través de efectos amplios sobre la expresión génica.

SUZ12 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SUZ12 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SUZ12 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SUZ12 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SUZ12, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SUZ12. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SUZ12 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SUZ12 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SUZ12 en células tumorales con expresión de SUZ12 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.