Superoxide Dismutase 1/SOD1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423069

Panoramica

Sod1 codifica la superossido dismutasi citosolica Cu/Zn SOD1, un enzima antiossidante primario che converte l’anione superossido in perossido di idrogeno e ossigeno, limitando il danno ossidativo. Modellando l’omeostasi redox cellulare, SOD1 influenza la funzione mitocondriale, il controllo della qualità proteica e le vie di segnalazione attivate dallo stress, inclusi i programmi antiossidanti mediati da NRF2. L’alterazione dell’attività di SOD1 modifica la suscettibilità allo stress ossidativo, alla neuroinfiammazione e alla proteotossicità, e la disfunzione di SOD1 è ampiamente utilizzata come punto di accesso meccanicistico per lo studio della neurodegenerazione e dei fenotipi correlati dei motoneuroni. Nei sistemi murini, Sod1 rappresenta un modello sperimentale maneggevole per collegare la gestione delle specie reattive dell’ossigeno con il metabolismo, il danno tissutale associato all’invecchiamento e la regolazione trascrizionale sensibile al redox.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Superoxide Dismutase 1/SOD1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sod1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sod1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sod1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Superoxide Dismutase 1/SOD1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sod1 per lo studio della segnalazione di Superoxide Dismutase 1/SOD1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sod1 critici per la funzione di Superoxide Dismutase 1/SOD1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sod1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Superoxide Dismutase 1/SOD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Superoxide Dismutase 1/SOD1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sod1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Superoxide Dismutase 1/SOD1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Superoxide Dismutase 1/SOD1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sod1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sod1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.