STC2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-405292-LAC

STC2 (stanniocalcina 2) è un fattore secreto di natura glicoproteica, simile a un ormone, implicato nell’adattamento cellulare allo stress metabolico e ambientale. Nelle cellule umane, STC2 viene indotta dallo stress del reticolo endoplasmatico e dalla segnalazione legata ai nutrienti e può modulare l’omeostasi di calcio e fosfato, le risposte allo stress ossidativo e le vie di sopravvivenza, includendo un crosstalk con PI3K–AKT e programmi associati all’ipossia. Un’alterazione dell’espressione di STC2 è stata riportata in molteplici tipi di tumore ed è spesso studiata in relazione a proliferazione, invasione, segnalazione angiogenica e fenotipi di risposta alla terapia. Al di là dell’oncologia, STC2 è rilevante anche per la ricerca su infiammazione, fibrosi e rimodellamento tissutale, in cui mediatori secreti della risposta allo stress plasmano la segnalazione paracrina.

Le particelle di attivazione lentivirale STC2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di STC2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale STC2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione STC2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di STC2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo STC2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.