Plasmide CRISPR/Cas9 KO STC2 (m): sc-423183

Présentation

Stc2 code la stanniocalcine 2 (STC2), une glycoprotéine sécrétée impliquée dans l’homéostasie du calcium et du phosphate ainsi que dans l’adaptation cellulaire au stress métabolique et au stress du microenvironnement. Dans les cellules de souris, l’expression de STC2 est régulée par des voies de signalisation sensibles au stress et est fréquemment associée au stress du réticulum endoplasmique et aux programmes de réponse aux protéines mal repliées (UPR), favorisant la survie en conditions d’hypoxie ou de limitation nutritionnelle. STC2 a été reliée à la modulation de la signalisation des facteurs de croissance, de l’équilibre rédox et de la protéostase, ce qui en fait un nœud fonctionnel au sein de voies influençant la prolifération et la différenciation. Des altérations de l’activité de STC2 ont été rapportées dans divers contextes pertinents pour les maladies, notamment des phénotypes associés au cancer, le stress inflammatoire et la dérégulation métabolique, faisant de Stc2 une cible utile pour des études mécanistiques dans des modèles mammifères.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO STC2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Stc2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Stc2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Stc2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine STC2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Stc2 pour l'étude de la signalisation de STC2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Stc2 essentiels à la fonction de STC2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Stc2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le STC2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le STC2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Stc2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le STC2 plasmide HDR (m) et le STC2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Stc2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Stc2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.