STC1 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-423182-LAC

La stanniocalcina 1 murina (Stc1) codifica la glicoproteina secreta STC1, un fattore pleiotropico di tipo ormonale implicato nell’omeostasi del calcio e del fosfato e in un’ampia segnalazione adattativa allo stress. STC1 influenza il metabolismo cellulare, l’equilibrio redox e la funzione mitocondriale ed è stata collegata a vie che regolano proliferazione, apoptosi, programmi angiogenici e risposte infiammatorie. In diversi tessuti, l’espressione di STC1 è modulata dall’ipossia e dalla segnalazione dei fattori di crescita e può rimodellare la comunicazione cellula–cellula all’interno dei microambienti. Una deregolazione di STC1 è stata associata a fenotipi rilevanti per la biologia dei tumori, il danno ischemico, la fibrosi e contesti di malattie immuno-mediate, rendendo Stc1 un bersaglio utile per studi meccanicistici.

Le particelle di attivazione lentivirale STC1 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Stc1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale STC1 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Stc1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di STC1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Stc1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.