Stat5b Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400878-ACT

O STAT5B humano codifica a Stat5b, um fator de transcrição dependente de sinal ativado a jusante de receptores de citocinas e fatores de crescimento por meio de quinases JAK, com dimerização induzida por fosforilação e translocação nuclear. A Stat5b regula programas transcricionais que controlam o desenvolvimento de linfócitos, a homeostase imune e o crescimento somático, e integra entradas de vias incluindo JAK–STAT e a comunicação cruzada com a sinalização MAPK e PI3K. A atividade desregulada de STAT5B está associada a uma responsividade alterada a citocinas e a transições aberrantes de estado celular relevantes para distúrbios imunológicos e para a biologia de neoplasias hematológicas. Como um hub transcricional, o STAT5B é amplamente estudado por seus efeitos sobre proliferação, diferenciação, sobrevivência e expressão gênica específica de linhagem.

Stat5b O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de STAT5B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Stat5b O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus STAT5B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição STAT5B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Stat5b. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus STAT5B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Stat5b no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Stat5b em células tumorais com expressão de STAT5B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.