Plásmido CRISPR de Activación (h) SSTR4: sc-403781-ACT

SSTR4 codifica el receptor de somatostatina 4, un GPCR acoplado a Gi/Go que se une a péptidos de somatostatina para modular la actividad de la adenilil ciclasa y la señalización aguas abajo de cAMP/PKA. La activación del receptor puede influir en la señalización MAPK, el flujo de calcio y la regulación de canales iónicos, moldeando la excitabilidad neuronal y las respuestas secretoras de manera dependiente del contexto. SSTR4 se expresa en múltiples tejidos y desempeña funciones destacadas en circuitos neuroendocrinos y sensoriales, donde contribuye a la regulación de la neurotransmisión y de redes de señalización inflamatoria. La alteración de la señalización de los receptores de somatostatina, incluidas las vías asociadas a SSTR4, se estudia en trastornos que implican el procesamiento del dolor, la neuroinflamación y la desregulación de la señalización hormonal.

SSTR4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SSTR4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SSTR4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SSTR4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SSTR4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SSTR4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SSTR4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SSTR4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SSTR4 en células tumorales con expresión de SSTR4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.