Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
SSB-2 Plasmide Double Nickase (h): sc-408079-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SSB-2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il SSB-2 Double Nickase Plasmid (h) e il SSB-2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SPSB2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SSB-2 Antibody (32-K): sc-100863
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SSB-2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-408079-NIC | 20 µg | $410.00 |
L’SPSB2 umano codifica SSB-2, una proteina adattatrice contenente un SOCS box che funge da componente di riconoscimento del substrato dei complessi E3 ubiquitina ligasi di tipo Cullin-RING. Attraverso il suo dominio SPRY, SSB-2 si lega a specifiche proteine client e ne promuove l’ubiquitinazione e la degradazione proteasomiale, modellando le reti di trasduzione del segnale a valle di stimoli di citochine e fattori di crescita. L’attività di SPSB2 è stata collegata alla regolazione della segnalazione infiammatoria e delle risposte immunitarie innate, inclusa la modulazione di vie che intersecano processi associati a JAK/STAT e NF-κB. Una proteostasi mediata dall’ubiquitina alterata che coinvolge SPSB2 può contribuire a cambiamenti dell’omeostasi immunitaria e a fenotipi rilevanti per la malattia in contesti in cui la segnalazione delle citochine e la stabilità proteica risultano perturbate.
SSB-2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SPSB2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SPSB2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SPSB2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SPSB2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.