SREBP-1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400094-LAC

SREBF1 umano codifica la proteina 1 legante gli elementi regolatori degli steroli (SREBP-1), un fattore di trascrizione ancorato alla membrana che viene attivato per via proteolitica per controllare l’anabolismo lipidico. SREBP-1 coordina programmi trascrizionali che regolano la sintesi de novo degli acidi grassi, la produzione di trigliceridi e la biogenesi dei fosfolipidi, integrando segnali nutrizionali e ormonali per mantenere l’omeostasi metabolica. Svolge un ruolo di primo piano nella segnalazione sensibile agli steroli e nelle vie lipogeniche inducendo geni come FASN, ACACA, SCD e i relativi enzimi di allungamento/desaturazione. La disregolazione dell’attività di SREBP-1 è associata ad alterazioni nella gestione dei lipidi e a fenotipi metabolici, ed è frequentemente studiata in relazione alla segnalazione insulinica, alla biologia della steatosi epatica e alle risposte allo stress dipendenti dai lipidi.

Le particelle di attivazione lentivirale SREBP-1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SREBF1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale SREBP-1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SREBF1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di SREBP-1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SREBF1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.