SR-B1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400990-ACT

SCARB1 kodiert den Scavenger-Rezeptor der Klasse B Typ 1 (SR-B1), einen multiligandfähigen Zelloberflächenrezeptor, der die selektive Aufnahme von Cholesterinestern aus HDL vermittelt und den bidirektionalen Lipidtransport koordiniert. SR-B1 trägt zur Regulation der zellulären Cholesterinhomöostase und der Membranzusammensetzung bei und beeinflusst dadurch die Steroidogeneseleistung, die Dynamik von Lipidtröpfchen sowie den Lipoproteinstoffwechsel in Hepatozyten und steroidogenen Geweben. Über diese Funktionen ist SR-B1 mit Signalwegen verknüpft, die den Lipidumsatz und inflammatorische Signalgebung steuern, einschließlich der Modulation von oxidativen Stressantworten und der Aktivität angeborener Immunrezeptoren. Eine veränderte SCARB1/SR-B1-Aktivität wurde mit Dyslipidämie und atheroskleroseassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht und wird häufig hinsichtlich ihrer Rolle beim metabolischen Remodeling und bei krankheitsrelevanter lipidspezifischer Signalübertragung in menschlichen Zellen untersucht.

SR-B1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SCARB1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SR-B1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SCARB1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SCARB1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SR-B1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SCARB1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SR-B1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SR-B1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SCARB1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.