SPRR2G Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-416907-ACT

SPRR2G (small proline-rich protein 2G) è un precursore dell’involucro corneo espresso prevalentemente negli epiteli stratificati, dove contribuisce alla formazione della barriera fungendo da substrato per la reticolazione mediata dalla transglutaminasi durante la differenziazione terminale dei cheratinociti. Opera nell’ambito dei programmi di differenziazione epidermica e cheratinizzazione, coordinati con il rimodellamento del citoscheletro e con reti geniche epiteliali sensibili allo stress. Un’espressione alterata dei membri della famiglia SPRR è comunemente osservata in condizioni infiammatorie cutanee che compromettono la barriera e nell’iperproliferazione epiteliale, e SPRR2G è stato utilizzato come indicatore molecolare dello stato di differenziazione e del rimodellamento tissutale. Queste caratteristiche rendono SPRR2G rilevante per lo studio dell’omeostasi epiteliale, delle risposte al danno e dei cambiamenti associati alla malattia nelle vie di differenziazione.

SPRR2G Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SPRR2G senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SPRR2G Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SPRR2G nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SPRR2G, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SPRR2G. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SPRR2G nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SPRR2G nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SPRR2G nelle cellule tumorali con espressione di SPRR2G silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.