SPACA1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406974

Panoramica

SPACA1 (sperm acrosome associated 1) codifica una proteina acrosomiale implicata nella morfogenesi della testa dello spermatozoo e nella biogenesi/organizzazione delle membrane acrosomiali durante la spermiogenesi. La sua funzione è collegata ai processi di differenziamento delle cellule germinali maschili, che dipendono da un traffico vescicolare coordinato, dal rimodellamento delle membrane e dall’organizzazione del citoscheletro per sostenere la formazione dell’acrosoma e l’acquisizione della competenza fecondante. Un’attività alterata di SPACA1 è stata associata, in contesti sperimentali, a difetti nella struttura degli spermatozoi e a una ridotta fertilità maschile, rendendolo rilevante per lo studio dei meccanismi del fallimento spermatogenico. In quanto fattore arricchito nel testicolo, SPACA1 è utile anche come marcatore e come nodo funzionale in vie che regolano lo sviluppo dei gameti e la biologia riproduttiva.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SPACA1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SPACA1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SPACA1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SPACA1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SPACA1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SPACA1 per lo studio della segnalazione di SPACA1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SPACA1 critici per la funzione di SPACA1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SPACA1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SPACA1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SPACA1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SPACA1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SPACA1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SPACA1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SPACA1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SPACA1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.