Partículas Lentivirales de Activación (h) SPA-L3: sc-411666-LAC

SIPA1L3 codifica la proteína 3 tipo 1 asociada a la proliferación inducida por señales (SPA-L3), una proteína andamiaje asociada a la vía Rap/Ras que conecta la señalización de pequeñas GTPasas con la remodelación del citoesqueleto y los programas de adhesión celular. A través de sus dominios modulares de interacción, se ha implicado a SPA-L3 en la coordinación de la dinámica de la actina, el tráfico de membrana y la organización de las uniones celulares, procesos que determinan la polaridad celular y la arquitectura tisular. La desregulación de la señalización Rap/Ras y el control alterado del citoesqueleto son rasgos recurrentes en la progresión tumoral y los fenotipos invasivos, lo que convierte a SIPA1L3 en un nodo útil para estudiar el acoplamiento entre señalización y estructura. En el sistema nervioso, marcos de señalización relacionados sustentan el crecimiento de neuritas y la organización sináptica, lo que aporta un contexto adicional para investigar mecanismos del desarrollo y neurobiológicos.

Las partículas de activación lentiviral SPA-L3 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de SIPA1L3 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral SPA-L3 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción SIPA1L3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de SPA-L3. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo SIPA1L3 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.