Sox2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400050-ACT

SOX2 codifica o fator de transcrição Sox2, um regulador central da pluripotência e da autorrenovação que coopera com OCT4 e NANOG para manter a identidade das células-tronco, ao mesmo tempo em que restringe o comprometimento com linhagens específicas. Em células humanas, Sox2 controla programas gênicos envolvidos na remodelação da cromatina, na especificação do ectoderma neural e em redes de sinalização do desenvolvimento, incluindo WNT, SHH, BMP, FGF e Notch. A expressão desregulada de SOX2 está associada a estados de diferenciação alterados, proliferação aberrante e plasticidade celular, e já foi relatada em contextos de anormalidades do neurodesenvolvimento e da biologia tumoral. Essas propriedades fazem de SOX2 um alvo amplamente utilizado para estudar circuitos transcricionais, regulação epigenética e transições de destino celular.

Sox2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SOX2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Sox2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SOX2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SOX2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Sox2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SOX2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Sox2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Sox2 em células tumorais com expressão de SOX2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.