Sos 1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-401135-LAC

SOS1 codifica o homólogo 1 de Son of sevenless (Sos1), um fator de troca de nucleotídeos de guanina (GEF) para Ras que catalisa a troca de GDP por GTP em RAS a jusante de receptores tirosina-quinase ativados e de complexos adaptadores como o GRB2. Ao acoplar a sinalização por fatores de crescimento às vias RAS–RAF–MEK–ERK e ao interagir com a atividade da via PI3K–AKT, a Sos1 contribui para a regulação da proliferação, diferenciação, migração e dinâmica do citoesqueleto. A função alterada de SOS1 ou a sinalização a montante desregulada pode modificar a saída de MAPK e é relevante para estudos de dependências de sinalização oncogênica e de mecanismos associados às rasopatias do desenvolvimento. Assim, SOS1 é um nó útil para dissecar, em células humanas, a amplitude e a duração do sinal de MAPK específicas do estímulo, o controle por retroalimentação e o crosstalk entre vias.

As Partículas de Ativação Lentivirais Sos 1 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de SOS1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Sos 1 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição SOS1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Sos 1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo SOS1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.