SNX3 Double Nickase Plasmid (h): sc-404028-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SNX3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SNX3 Double-Nickase-Plasmid (h) und SNX3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SNX3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SNX3: sc-376667
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SNX3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404028-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SNX3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404028-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SNX3 (Sorting Nexin 3) ist ein PX-Domänen-Sorting-Nexin, das an Phosphatidylinositol-3-phosphat auf frühen Endosomen bindet und dabei hilft, die Sortierung von Fracht durch das endosomale System zu organisieren. Es ist ein Schlüsselbestandteil des retromer-assoziierten Transports und unterstützt sowohl den Rücktransport von Endosomen zum Golgi-Apparat als auch das regulierte Recycling von Membranproteinen. Dadurch prägt es die Verfügbarkeit von Rezeptoren und die nachgeschaltete Signalübertragung. Über seine Funktionen bei Membranremodellierung und Frachtauswahl beeinflusst SNX3 Prozesse wie Nährstoffaufnahme, Abschwächung von Signalen und die Aufrechterhaltung der zellulären Polarität. Fehlregulierte endosomale Transportwege, an denen SNX3 und die Retromer-Funktion beteiligt sind, werden häufig im Zusammenhang mit Neurodegeneration, Pathogeneintritt und veränderter Rezeptorsignalgebung untersucht, wie sie in zahlreichen Krankheitsmodellen beobachtet wird.
SNX3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SNX3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SNX3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SNX3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SNX3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.