SNX3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404028-ACT

SNX3 (sorting nexin 3) è un fattore del traffico endosomale contenente un dominio PX che si lega al fosfatidilinositolo 3-fosfato e contribuisce a organizzare la dinamica di membrana degli endosomi precoci. Agisce insieme al complesso retromero per promuovere il riciclo dall’endosoma alla rete trans-Golgi e per regolare lo smistamento di recettori e trasportatori della membrana plasmatica, influenzando l’intensità della segnalazione e l’omeostasi di membrana. Grazie ai suoi ruoli nel recupero del carico e nel riciclo endocitico, SNX3 influisce su vie legate alla secrezione di WNT e al traffico dei recettori, nonché su processi più ampi correlati a lisosomi e autofagia. Alterazioni nello smistamento endosomale e nel trasporto associato al retromero sono implicate in neurodegenerazione, biologia del cancro e fenotipi metabolici, rendendo SNX3 un nodo utile per studi meccanicistici sulla segnalazione dipendente dal traffico.

SNX3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SNX3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

SNX3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SNX3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SNX3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di SNX3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SNX3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da SNX3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via SNX3 nelle cellule tumorali con espressione di SNX3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.