SNAI 1 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-423047-ACT

Snai1 kodiert den Zinkfinger-Transkriptionsfaktor SNAI1, einen zentralen Regulator der epithelial–mesenchymalen Transition (EMT), der epitheliale Junction-Gene wie Cdh1 reprimiert und Programme der Zytoskelett- und Adhäsionsorganisation umgestaltet. In Mauszellen integriert SNAI1 Signale aus TGF-β-, WNT/β‑Catenin-, Notch- und hypoxieassoziierten Signalwegen, um Linienplastizität, Motilität und Interaktionen mit der extrazellulären Matrix zu steuern. Dieses transkriptionelle Netzwerk ist für die embryonale Morphogenese und Gewebeumgestaltung zentral; eine fehlregulierte SNAI1-Aktivität wird häufig im Zusammenhang mit Fibrose und invasiver Tumorbiologie untersucht. SNAI1-abhängige Programme überschneiden sich zudem mit inflammatorischer Signalgebung und der Aufrechterhaltung stammzellähnlicher Zellzustände, was seine breite Relevanz für mechanistische Signalwegforschung unterstreicht.

SNAI 1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Snai1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SNAI 1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Snai1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Snai1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SNAI 1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Snai1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SNAI 1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SNAI 1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Snai1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.