SMG5 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-406989-LAC

SMG5 codifica una componente centrale del macchinario di degradazione dell’mRNA mediata da codoni di stop prematuri (nonsense-mediated mRNA decay, NMD), che promuove la sorveglianza e la rimozione dei trascritti contenenti codoni di terminazione prematuri. SMG5 coopera con SMG6 e SMG7 a valle della fosforilazione di UPF1 per reclutare complessi di protein-fosfatasi e facilitare la defosforilazione di UPF1, accoppiando la terminazione della traduzione alla degradazione dell’mRNA. Attraverso questo ruolo, SMG5 contribuisce a mantenere il controllo di qualità dell’RNA, modella l’omeostasi del trascrittoma e influenza le risposte allo stress cellulare e i programmi di differenziamento. La disregolazione dell’NMD e l’alterazione della funzione di SMG5 sono state associate a reti anomale di espressione genica implicate nella biologia del cancro e nei meccanismi di malattie del neurosviluppo e neurodegenerative, rendendo SMG5 un nodo utile per l’analisi delle vie di segnalazione.

Le particelle di attivazione lentivirale SMG5 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SMG5 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale SMG5 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SMG5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di SMG5. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SMG5 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.