SmcX Plasmide Double Nickase (h): sc-405760-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SmcX Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il SmcX Double Nickase Plasmid (h) e il SmcX Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira KDM5C. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SmcX Antibody (G-10): sc-376255
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SmcX Plasmide Double Nickase (h) | sc-405760-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SmcX Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405760-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KDM5C codifica la demetilasi della lisina SmcX, un enzima con dominio JmjC che rimuove i segni H3K4me3/2 per modulare programmi trascrizionali legati allo sviluppo neuronale, all’organizzazione della cromatina e al controllo del ciclo cellulare. SmcX opera all’interno di reti di rimodellamento della cromatina e interagisce con la regolazione epigenetica dell’attività di enhancer e promotori, influenzando vie quali le risposte al danno al DNA e l’espressione genica associata alla differenziazione. La disregolazione o varianti patogene in KDM5C sono associate a disturbi neuroevolutivi legati al cromosoma X, inclusa la disabilità intellettiva, e l’alterazione dell’attività di SmcX è stata studiata nel contesto dell’instabilità trascrizionale e del mantenimento del genoma. Queste caratteristiche rendono KDM5C un bersaglio utile per indagare il controllo epigenetico dell’espressione genica e stati della cromatina rilevanti per la malattia in modelli cellulari umani.
SmcX Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KDM5C nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KDM5C. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KDM5C. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KDM5C interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.