Slfn5 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-408333-LAC

SLFN5 umano codifica Schlafen family member 5 (Slfn5), una proteina stimolata dall’interferone implicata nella regolazione di programmi trascrizionali che modellano la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA e la segnalazione dell’immunità innata. Slfn5 è stata associata alla modulazione degli output della via interferone di tipo I/JAK–STAT e, più in generale, a un controllo dell’espressione genica mediato dalla cromatina, influenzando gli stati di proliferazione e differenziamento cellulare. Un’espressione deregolata di SLFN5 è stata riportata in molteplici contesti oncologici e stati di segnalazione infiammatoria, dove può correlare con alterazioni della crescita delle cellule tumorali, delle risposte allo stress e di firme trascrizionali legate all’immunità. Queste caratteristiche rendono SLFN5 un bersaglio utile per analizzare la regolazione guidata dall’interferone, i checkpoint della proliferazione e le reti di espressione genica rilevanti per fenotipi associati a malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale Slfn5 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di SLFN5 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Slfn5 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione SLFN5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Slfn5. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo SLFN5 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.