SLC43A2 Plasmide Double Nickase (m): sc-431993-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SLC43A2 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il SLC43A2 Double Nickase Plasmid (m) e il SLC43A2 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Slc43a2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SLC43A2 Plasmide Double Nickase (m) | sc-431993-NIC | 20 µg | $410.00 |
Slc43a2 codifica il trasportatore murino di aminoacidi neutri di grandi dimensioni SLC43A2 (LAT4), una proteina di membrana che facilita l’assorbimento e l’efflusso, indipendenti dal sodio, di aminoacidi essenziali e a catena ramificata come leucina, isoleucina e valina. Regolando la disponibilità intracellulare di aminoacidi, SLC43A2 influenza programmi di nutrient-sensing, tra cui la segnalazione di mTORC1, il controllo della traduzione e una più ampia omeostasi metabolica. Alterazioni del trasporto di aminoacidi sono frequentemente associate a cambiamenti nella crescita cellulare, nell’adattamento allo stress e nella funzione delle cellule immunitarie, rendendo Slc43a2 rilevante per studi sul riprogrammamento metabolico e sulla competizione per i nutrienti nel microambiente. Un’attività del trasportatore deregolata è stata associata a fenotipi proliferativi in modelli sperimentali di cancro e di immunometabolismo, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico che collega il trasporto alla segnalazione.
SLC43A2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Slc43a2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Slc43a2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Slc43a2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Slc43a2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.