SG2NA Double Nickaseプラスミド (h): sc-405152-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- SG2NA Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- SG2NAダブルニカースプラスミド（h）およびSG2NAダブルニカースプラスミド（h2）は、STRN3を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: SG2NA 抗体 (S68): sc-13562
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
SG2NA Double Nickaseプラスミド (h) | sc-405152-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SG2NA Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-405152-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
STRN3は、複数のタンパク質からなるシグナル伝達複合体の形成を統率するWDリピート型の足場タンパク質（スキャフォールド）であるストリアチンファミリーの一員、ストリアチン-3（SG2NA）をコードします。SG2NAはSTRIPAK関連複合体に関与し、セリン／スレオニンホスファターゼやキナーゼの空間的な制御を支えることで、膜近傍のシグナル伝達を細胞骨格の再編成や小胞輸送へと結び付けます。これらの相互作用を通じて、STRN3は細胞極性、細胞移動、細胞周期進行を制御する経路に影響を与え得るほか、異常なシグナルネットワークの構造が腫瘍形成様の表現型に寄与する状況において、その制御破綻（ディスレギュレーション）が研究されています。さらにSTRN3は、ストレス応答性シグナルの調節や、細胞内区画をまたいだタンパク質複合体ダイナミクスの制御における役割についても検討されています。
SG2NA ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における STRN3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、STRN3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、STRN3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、STRN3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。