Sg II Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402906-ACT

SCG2 codifica a secretogranina II (Sg II), um membro da família das graninas que se localiza em grânulos secretores de núcleo denso em células neuroendócrinas e neurais, apoiando a exocitose regulada. O processamento proteolítico da Sg II gera peptídeos bioativos, como a secretoneurina, que modulam a quimiotaxia, o crescimento de neuritos e a dinâmica da via secretora, ligando a SCG2 à biogênese de vesículas, à acidificação dos grânulos e à secreção acoplada a estímulos. Por meio dessas funções, a atividade de SCG2 se intersecta com redes de sinalização neuroendócrina e vias de tráfego de células inflamatórias. Alterações na expressão de SCG2 e nos perfis de peptídeos de graninas foram relatadas em contextos que incluem a biologia de tumores neuroendócrinos e disfunção secretória associada a doenças neurológicas e metabólicas, tornando-a um marcador útil e um nó mecanístico para estudos focados em secreção.

Sg II O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SCG2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Sg II O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SCG2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SCG2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Sg II. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SCG2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Sg II no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Sg II em células tumorais com expressão de SCG2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.