Plásmido CRISPR de Activación (m) Serpinb3a: sc-422808-ACT

Serpinb3a de ratón codifica un inhibidor de proteasas de serina (serpin) de la familia B, implicado en la regulación de la actividad de proteasas intracelulares, las respuestas al estrés celular y la homeostasis epitelial. Como serpin intracelular, Serpinb3a puede influir en procesos dependientes de proteasas vinculados a la inflamación, la remodelación tisular y la integridad de la barrera, intersectando con vías que modulan la apoptosis, la adaptación al estrés oxidativo y la señalización inmunitaria. La expresión alterada de miembros de la familia serpin se ha asociado con microambientes inflamatorios desregulados y fenotipos de daño epitelial, lo que convierte a Serpinb3a en un nodo molecular útil para estudiar programas de estrés y proteostasis dependientes del contexto. En modelos murinos, la dinámica de expresión de Serpinb3a se evalúa con frecuencia en estudios de daño tisular, remodelación fibrótica y patología mediada por el sistema inmunitario, donde el equilibrio proteasa–antiproteasa es un determinante clave de los resultados celulares.

Serpinb3a El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Serpinb3a sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Serpinb3a El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Serpinb3a en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Serpinb3a, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Serpinb3a. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Serpinb3a y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Serpinb3a en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Serpinb3a en células tumorales con expresión de Serpinb3a silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.