SERCA2 Plasmide Double Nickase (h): sc-400417-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SERCA2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il SERCA2 Double Nickase Plasmid (h) e il SERCA2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ATP2A2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SERCA2 Antibody (F-1): sc-376235
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SERCA2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400417-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SERCA2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400417-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP2A2 codifica la Ca2+-ATPasi del reticolo sarco/endoplasmatico umano SERCA2, un’ATPasi di tipo P che trasporta il Ca2+ citosolico nel lume del RE per sostenere l’immagazzinamento di Ca2+ e l’omeostasi della segnalazione del Ca2+. Modulando il carico di Ca2+ del RE, SERCA2 regola l’accoppiamento eccitazione–contrazione, la dinamica dell’ingresso di Ca2+ operato dallo svuotamento delle riserve (SOCE) e il controllo Ca2+-dipendente del ripiegamento proteico, della secrezione e delle vie di sopravvivenza cellulare legate alle risposte allo stress del RE. L’alterazione di ATP2A2 compromette le oscillazioni intracellulari di Ca2+ e può modificare le reti di segnalazione a valle, incluse quelle della calcineurina/NFAT e della risposta a proteine mal ripiegate (unfolded protein response, UPR). Le varianti di ATP2A2 sono associate alla malattia di Darier e sono state implicate in contesti in cui la gestione del Ca2+ nel RE influenza la fisiologia cardiaca ed epiteliale, supportando studi meccanicistici sulla segnalazione del Ca2+ e sulla proteostasi.
SERCA2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ATP2A2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ATP2A2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ATP2A2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ATP2A2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.