Septin 5 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402514-NIC

O SEPT5 humano codifica a septina 5, uma proteína citosquelética ligante de GTP que se organiza em filamentos de septinas hetero-oligoméricos e contribui para a organização de membranas, o tráfego vesicular e o controlo espacial da dinâmica de actina e microtúbulos. A septina 5 é enriquecida em contextos neuronais e secretórios e tem sido associada à exocitose e à ancoragem (docking) de vesículas sinápticas através de interações com a maquinaria associada a SNARE. Andaimes (scaffolds) de septinas dependentes de SEPT5 influenciam a polaridade celular, a citocinese e a compartimentalização na membrana plasmática, processos que moldam o transporte intracelular e a propagação de sinais. Alterações na expressão de SEPT5 ou perturbações no locus foram reportadas em contextos de investigação neurodesenvolvimental e neuropsiquiátrica e em conjuntos de dados de expressão associados ao cancro, sustentando a sua utilização como um nó mecanístico em estudos de remodelação do citoesqueleto e secreção.

Septin 5 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus SEPT5 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de SEPT5. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função SEPT5. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com SEPT5 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.