Plasmide CRISPR d'Activation (m) Septin 4: sc-422333-ACT

Le gène murin Sept4 code la septine 4, un échafaudage cytosquelettique liant le GTP qui s’assemble en filaments hétéro-oligomériques et en structures en anneau au niveau du cortex cellulaire. La septine 4 coordonne l’organisation de l’actine et des microtubules afin de réguler la cytocinèse, la polarité cellulaire, la compartimentation membranaire et le trafic vésiculaire, avec des rôles supplémentaires liés à l’architecture des cils dans des contextes spécialisés. En façonnant des barrières de diffusion et en coordonnant des événements contractiles, la septine 4 influence des processus tels que la morphogenèse neuronale et la spermatogenèse, et sa dérégulation est étudiée en lien avec la neurodégénérescence, le remodelage du cytosquelette associé aux tumeurs et des phénotypes de fertilité. Ces fonctions font de Sept4 un nœud utile pour explorer la signalisation du cytosquelette, le contrôle de la division cellulaire et les programmes de remodelage sensibles au stress dans des modèles murins.

Septin 4 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Sept4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Septin 4 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Sept4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Sept4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Septin 4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Sept4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Septin 4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Septin 4 dans les cellules tumorales présentant une expression de Sept4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.