Septin 3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406325

Panoramica

SEPT3 codifica la septina 3, una proteina citoscheletrica legante il GTP della famiglia delle septine che si assembla in filamenti etero-oligomerici e strutture ad anello per organizzare domini di membrana. La septina 3 contribuisce a processi associati ad actina e microtubuli, tra cui il traffico vescicolare, la crescita dei neuriti e il controllo spaziale della citocinesi e della polarità cellulare, grazie a funzioni di scaffold e di barriera alla diffusione. Nel sistema nervoso, l’espressione di SEPT3 è arricchita nei neuroni ed è stata collegata alla regolazione dell’architettura sinaptica e della dinamica delle vescicole, associandola a vie che governano la differenziazione neuronale e la trasmissione sinaptica. Una disorganizzazione della rete delle septine e alterazioni associate a SEPT3 sono state riportate in studi sulla neurodegenerazione e sulla biologia tumorale, a supporto della sua utilità come nodo meccanicistico nella ricerca sul rimodellamento del citoscheletro e delle membrane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Septin 3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SEPT3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SEPT3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SEPT3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Septin 3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SEPT3 per lo studio della segnalazione di Septin 3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SEPT3 critici per la funzione di Septin 3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SEPT3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Septin 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Septin 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SEPT3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Septin 3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Septin 3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SEPT3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SEPT3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.