Sec8 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422866

Panoramica

Exoc4 codifica Sec8, una subunità essenziale del complesso octamerico dell’esocisto, che media l’ancoraggio delle vescicole secretorie a siti definiti della membrana plasmatica prima della fusione dipendente dalle SNARE. Nelle cellule di topo, Sec8 contribuisce a coordinare l’esocitosi polarizzata e il traffico di membrana che sostengono processi quali la polarità epiteliale, l’estensione dei neuriti, la citocinesi e il riciclo dei recettori, integrando segnali provenienti da piccole GTPasi tra cui Ral, Rab e Cdc42. La funzione dell’esocisto è strettamente collegata al rimodellamento del citoscheletro e alla migrazione cellulare direzionale, rendendo Sec8 un nodo utile per studiare le vie che regolano l’organizzazione dei tessuti e la fedeltà del trasporto intracellulare. La disregolazione del traffico dipendente dall’esocisto è stata associata ad alterazioni della polarità cellulare e a dinamiche di segnalazione aberranti rilevanti per la ricerca nello sviluppo e nelle neuroscienze.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Sec8 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Exoc4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Exoc4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Exoc4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Sec8.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Exoc4 per lo studio della segnalazione di Sec8, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Exoc4 critici per la funzione di Sec8
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Exoc4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Sec8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Sec8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Exoc4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Sec8 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Sec8 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Exoc4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Exoc4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.