SEC24A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-429522

Descripción general

Sec24a codifica SEC24A, un componente central de la cubierta COPII que selecciona la carga y dirige el transporte anterógrado desde el retículo endoplásmico hasta el aparato de Golgi. Al asociarse con SEC23 e interactuar con adaptadores de carga, SEC24A ayuda a regular el tráfico secretor, la proteostasis del RE y la homeostasis de membranas, lo que influye en el manejo de lípidos y en la composición de los receptores de la superficie celular. La alteración de la exportación dependiente de COPII puede desencadenar respuestas de estrés del RE y modificar la entrega de matriz extracelular y de moléculas de señalización, lo que vincula la función de SEC24A con vías que gobiernan el metabolismo y la homeostasis tisular. En ratones, Sec24a se ha utilizado para investigar cómo el empaquetamiento selectivo de carga afecta la biología sistémica de lípidos y lipoproteínas, así como fenotipos más amplios de la vía secretora.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SEC24A (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Sec24a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Sec24a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Sec24a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SEC24A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Sec24a para la investigación de la señalización de SEC24A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Sec24a críticos para la función de SEC24A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Sec24a para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SEC24A CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SEC24A CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Sec24a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SEC24A (m) y el plásmido HDR SEC24A (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Sec24a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Sec24a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.