Sec15A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405860

Visão geral

EXOC6 codifica a Sec15A, um componente central do complexo exocisto octamérico que medeia o ancoramento, regulado espacialmente, de vesículas secretoras à membrana plasmática antes da fusão dependente de SNARE. A Sec15A ajuda a acoplar a sinalização de GTPases das famílias RAB e RHO à exocitose polarizada, sustentando a entrega de proteínas de membrana, a migração celular, a citocinese e a polaridade epitelial. Por meio do seu papel no tráfego vesicular e na remodelação de membranas, EXOC6 é relevante para vias que moldam as junções célula–célula e a reciclagem de receptores, processos frequentemente perturbados em fenótipos celulares proliferativos e invasivos. A desregulação de subunidades do exocisto, incluindo a Sec15A, tem sido associada na literatura a programas de secreção e saídas de sinalização alterados em contextos relacionados ao câncer e ao neurodesenvolvimento, tornando EXOC6 um alvo útil para estudos mecanísticos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Sec15A (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene EXOC6 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do EXOC6, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do EXOC6 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Sec15A.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de EXOC6 para a investigação da sinalização de Sec15A, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) EXOC6 críticos para a função Sec15A
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos EXOC6 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Sec15A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Sec15A Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus EXOC6. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Sec15A Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Sec15A (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia EXOC6 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo EXOC6 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.