Plasmide CRISPR d'Activation (h) SCUBE2: sc-410079-ACT

SCUBE2 (signal peptide, domaine CUB, domaine de type EGF 2) code une glycoprotéine sécrétée associée à la surface cellulaire, qui module la signalisation extracellulaire et la communication cellule–cellule. Grâce à ses domaines CUB et de type EGF, SCUBE2 serait impliquée dans la régulation de la disponibilité des facteurs de croissance et de la dynamique de signalisation des récepteurs, avec des liens rapportés avec des programmes du développement ainsi qu’avec des comportements de cellules endothéliales ou épithéliales. Une expression altérée de SCUBE2 a été associée à une prolifération, une migration et une différenciation dérégulées dans plusieurs contextes pertinents pour la maladie, notamment en biologie du cancer et dans le remodelage vasculaire. En tant que régulateur extracellulaire associé à des voies de signalisation, SCUBE2 est souvent étudiée pour son impact sur les réseaux de signalisation qui façonnent l’organisation tissulaire et les interactions au sein du microenvironnement tumoral.

SCUBE2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SCUBE2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SCUBE2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SCUBE2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SCUBE2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SCUBE2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SCUBE2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SCUBE2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SCUBE2 dans les cellules tumorales présentant une expression de SCUBE2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.