Scrib Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-430616

Panoramica

Scrib codifica Scribble, una proteina scaffold della polarità conservata che si localizza nelle giunzioni cellula–cellula e coordina la polarità apico-basale, l’architettura epiteliale e la migrazione cellulare direzionata. Nei sistemi murini, Scribble integra segnali provenienti dalle reti di polarità con regolatori giunzionali e del citoscheletro, influenzando processi quali la polarità planare della cellula, il traffico vescicolare e la morfogenesi tissutale. L’alterazione del controllo della polarità dipendente da SCRIB è associata a proliferazione e invasività modificate, collegando questa via ad anomalie dello sviluppo e a fenotipi rilevanti per il cancro. Scrib è quindi ampiamente studiato in contesti in cui l’integrità delle giunzioni, la migrazione e la segnalazione dipendente dalla polarità modellano l’organizzazione dei tessuti e i meccanismi di malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Scrib (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Scrib in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Scrib insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Scrib a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Scrib.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Scrib per lo studio della segnalazione di Scrib, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Scrib critici per la funzione di Scrib
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Scrib per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Scrib CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Scrib CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Scrib. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Scrib Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Scrib (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Scrib per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Scrib definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.