SCAP CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401474-ACT

ヒトSCAP（SREBFシャペロン）は小胞体膜タンパク質で、ステロールセンサーとして、またSREBP転写因子のエスコート因子として機能し、調節されたゴルジ体への輸送を可能にしてプロテアーゼによる活性化を促します。このSCAP–SREBP軸を介して、SCAPはコレステロールおよび脂肪酸の生合成、膜脂質の恒常性、ならびに栄養素やステロールの利用可能性に応じた適応応答を制御する転写プログラムを統括します。SCAPの活性は、INSIGによる小胞体内保持、ER（小胞体）からゴルジ体への輸送、そして脂質合成関連遺伝子発現のフィードバック制御と連動しています。SCAP依存性シグナルの破綻は、代謝疾患で見られる脂質代謝の変化や、複数のがんの状況において増殖およびストレス適応を支える脂質リプログラミングと関連づけられています。

SCAP CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SCAPの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SCAP CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SCAP 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSCAP転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SCAPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSCAP遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSCAP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSCAP発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSCAP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。