SARP3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-424898

Panoramica

Sfrp5 codifica SARP3, una proteina secreta correlata a Frizzled che modula la disponibilità extracellulare dei ligandi Wnt e regola finemente la segnalazione Wnt/β-catenina e quella Wnt non canonica. Modellando le interazioni recettore–ligando sulla superficie cellulare, SARP3 influenza la specificazione del destino cellulare, la proliferazione e il rimodellamento dei tessuti durante lo sviluppo e nell’omeostasi dell’adulto. Nei modelli murini, un’alterata attività di Sfrp5 è stata collegata a una biologia del tessuto adiposo disfunzionale, infiammazione e fenotipi metabolici, rendendolo rilevante per studi sulla sensibilità all’insulina e sul bilancio energetico. La sua natura secreta colloca inoltre SARP3 come un nodo chiave della segnalazione paracrina nei microambienti stromali–immunitari–epiteliali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SARP3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sfrp5 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sfrp5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sfrp5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SARP3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sfrp5 per lo studio della segnalazione di SARP3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sfrp5 critici per la funzione di SARP3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sfrp5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SARP3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SARP3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sfrp5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SARP3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SARP3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sfrp5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sfrp5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.