Plásmido Doble Nickase (h) SAP: sc-402165-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)SAP consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa SAP (h) y el plásmido de doble nickasa SAP (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a APCS. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: SAP Anticuerpo (C-11): sc-393948
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) SAP | sc-402165-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) SAP | sc-402165-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
APCS codifica el componente P amiloide sérico (SAP), una proteína de reconocimiento de patrones de la familia de las pentraxinas que circula en el plasma y se une a ligandos de manera dependiente del calcio, incluidos el ADN, la cromatina y polisacáridos microbianos. SAP contribuye a la vigilancia inmunitaria innata y a la opsonización al participar en procesos asociados al complemento y en vías de depuración mediadas por receptores Fc, y puede asociarse con componentes de la matriz extracelular durante respuestas inflamatorias. Gracias a su alta afinidad de unión a fibrillas amiloides y otros agregados de proteínas mal plegadas, SAP se utiliza ampliamente como herramienta molecular para estudiar la biología del amiloide, la deposición proteica y la persistencia de agregados extracelulares en los tejidos. Las interacciones alteradas de SAP y los cambios regulatorios vinculados a APCS se han investigado en el contexto de la inflamación sistémica y de patologías asociadas al amiloide, lo que respalda estudios mecanísticos sobre el manejo de complejos inmunes y la estabilización de agregados.
SAP El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus APCS en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de APCS. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de APCS. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con APCS alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.