SAP 145 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403214-ACT

SF3B2 codifica a SAP 145, um componente central do subcomplexo SF3b no pequeno ribonucleoproteína nuclear U2, que promove a montagem do spliceossomo e o reconhecimento preciso do ponto de ramificação durante o splicing do pré-mRNA. Ao coordenar a seleção dos sítios de splicing e a definição de éxons, a SAP 145 sustenta a integridade do transcriptoma e influencia processos a jusante, incluindo a progressão do ciclo celular, respostas a danos no DNA e programas de expressão gênica adaptativos ao estresse. A desregulação de fatores do spliceossomo pode deslocar o equilíbrio de isoformas e alterar a expressão de vias que controlam proliferação e apoptose, tornando SF3B2 um nó útil para estudar mecanismos de processamento aberrante de RNA em contextos relevantes para doenças.

SAP 145 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SF3B2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SAP 145 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SF3B2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SF3B2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SAP 145. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SF3B2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SAP 145 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SAP 145 em células tumorais com expressão de SF3B2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.