Plasmide CRISPR d'Activation (h) SAMHD1: sc-406002-ACT

La SAMHD1 humaine (protéine 1 contenant des domaines SAM et HD) est une dNTP triphosphohydrolase qui régule les réserves intracellulaires de désoxynucléotides, influençant ainsi la fidélité de la réplication de l’ADN, la capacité de réparation et la stabilité du génome. En contrôlant la disponibilité des dNTP, SAMHD1 s’inscrit dans les réponses au stress réplicatif et les voies de signalisation des dommages à l’ADN, notamment les processus qui façonnent la progression du cycle cellulaire et le maintien de l’homéostasie nucléotidique. SAMHD1 limite également la réplication des rétrovirus dans les cellules myéloïdes et les lymphocytes T au repos en réduisant la quantité de substrats dNTP nécessaires à la rétrotranscription, ce qui l’associe à la régulation de l’immunité innée. La dérégulation ou les mutations de SAMHD1 ont été associées à des phénotypes inflammatoires et auto-immuns et ont été étudiées dans le contexte des interactions virus–hôte et du stress réplicatif lié au cancer.

SAMHD1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SAMHD1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SAMHD1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SAMHD1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SAMHD1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SAMHD1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SAMHD1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SAMHD1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SAMHD1 dans les cellules tumorales présentant une expression de SAMHD1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.