Plasmide CRISPR d'Activation (h) SAF-B: sc-403795-ACT

SAFB (SAF-B, « scaffold attachment factor B ») est une protéine de liaison à l’ADN et à l’ARN associée à la matrice nucléaire, qui coordonne l’organisation de la chromatine avec le contrôle transcriptionnel et la maturation des pré-ARNm. Elle interagit avec les régions d’attachement au scaffold/à la matrice et régule des programmes d’expression génique liés à l’activité de l’ARN polymérase II, à l’épissage alternatif et à la transcription induite par le stress. SAF-B a été impliquée dans la signalisation des récepteurs hormonaux, en particulier dans les réseaux de régulation associés au récepteur des œstrogènes, et contribue au maintien du fonctionnement du génome en couplant l’architecture nucléaire au métabolisme de l’ARN. Une dérégulation de l’expression ou de la fonction de SAFB a été associée à des états transcriptionnels altérés observés dans des voies liées au cancer et dans d’autres troubles impliquant une régulation aberrante des gènes.

SAF-B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SAFB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SAF-B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SAFB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SAFB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SAF-B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SAFB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SAF-B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SAF-B dans les cellules tumorales présentant une expression de SAFB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.